代谢稳定性

实现代谢稳定性的方法

• 测试系统：合并冷冻保存的肝细胞、肝微粒体或血浆
• 测试物种：小鼠、大鼠、狗、兔子、小型猪、猴子和人类；可根据要求增加其他物种
• 供试品浓度：一式三份，在每个物种中测试两种浓度（1和10 µM）

肝细胞中的代谢稳定性

供试品在两种浓度下培养，以大约1 x 10⁶肝细胞/ mL的浓度悬浮在培养基E中长达5个时点，并通过添加有机溶剂停止培养。

对照培养仅在培养基中进行，以确定在培养条件下供试品的稳定性。用7-乙氧基香豆素或其他合适的标记物评估每组肝细胞的代谢完整性。

血浆中的代谢稳定性

将供试品在两种浓度下在血浆中培养长达5个时点，然后通过添加有机溶剂停止培养。阳性对照培养包括普鲁卡因（羧酸酯酶水解）或其他合适的代谢标记物。

微粒体中的代谢稳定性

在存在NADPH的情况下，将供试品与微粒体（0.5 mg/ml蛋白质）在两个浓度下培养长达5个时点，并通过添加有机溶剂停止培养。在不存在NADPH的情况下进行对照培养，以确定在培养条件下供试品的稳定性。

使用7-乙氧基香豆素或其他合适的标记物评估每组微粒体1相酶的代谢完整性。

样本分析

使用液相色谱-质谱分析法分析培养样本中的残留供试品。然后确定样本中残留的供试品浓度百分比，并与初始浓度进行比较。经过批准后，可以采用LC-MS对所选样本进行进一步分析，以表征或鉴定代谢产物。

交付成果

这些测定法利用细胞或亚细胞组分提供药物稳定性信息（以半衰期和固有清除率计算）。进一步分析培养产物以进行代谢产物分析和鉴定可以阐明生物转化途径，并更好地比较临床前受试物种与人类的代谢产物。